根据文献的方法部分，研究团队在原位杂交（In situ hybridization）实验中采用了AATBioquest的Styramide™Signal Amplification(PSA™)系统（酪胺信号放大技术），该系统专门用于检测DIG标记的探针。以下为具体解析：
一、标记对象与标记方法
1. 标记对象：
- ① 针对斑马鱼嗅觉玫瑰花结（Olfactory Rosette, OR）中的paqr5b mRNA，使用DIG标记的反义RNA探针（Antisense probe）。
- ② 通过抗DIG-POD（辣根过氧化物酶）结合探针后，利用酪胺信号放大系统提高荧光信号的强度。
2. 标记步骤：
- ① 探针结合：DIG标记的RNA探针与目标mRNA结合。
- ② 酶联反应：使用抗DIG-POD抗体（Fab片段）与探针进行结合。
- ③ 信号放大：添加HRP底物（酪胺衍生物Styramide™），在HRP的催化下，酪胺底物被激活并共价沉积在目标位点附近，形成高密度的荧光标记。
二、染料的优点与特点
| 特性 | TSA技术 | 传统荧光标记 |
|---|---|---|
| 灵敏度 | 提高10-100倍 | 低 |
| 空间分辨率 | 高（局部沉积） | 低（扩散背景） |
| 多色兼容性 | 支持多通道（FITC/Cy3/Cy5） | 有限 |
| 适用样本 | 组织切片、低丰度靶标 | 高表达靶标 |
三、文献中的实验流程与结果
1. 样本固定与切片
2. 探针杂交（DIG标记的paqr5b反义探针）
3. 抗DIG-POD抗体结合
4. Styramide™ PSA信号放大（HRP催化）
5. 荧光显微镜成像
6. 定量分析（如神经元密度与信号强度）
结果解读：
- ① 在野生型斑马鱼OR中，paqr5bmRNA在神经元中高表达（绿色荧光信号）。
- ② 在paqr5b⁻/⁻突变体中，信号完全消失，证实基因敲除的有效性。
- ③ TSA技术的高灵敏度揭示了神经元亚群中的细微表达差异。
总结
尊龙凯时的Styramide Signal Amplification系统通过酶促信号放大与高分辨率荧光标记，为复杂生物样本的研究树立了“黄金标准”。该技术在低丰度靶标检测、多色复用及精细结构成像方面的优势，为神经科学、癌症研究和发育生物学领域提供了无可替代的技术支撑。结合本文案例，该技术在单细胞组学与空间转录组学中的应用潜力巨大，为生物医疗研究进一步开拓了广泛前景。
津公网安备 12011302120117